引物设计&酶切位点添加&保护碱基. 引物包括3部分:3‘端和模板互补的部分;5’端不必和模板互补(比如酶切位点的添加);酶切位点一端的保护碱基的添加。
不一定的,如果你设计的酶切位点是在上游就在5‘端加保护碱基,在下游就在3’端加,总这是要保证产物的两头都是酶切位点就对了,保护碱基一般要3个比较保险,大体的原则是加入的保护碱基不能使引物产生发卡等结构,这个用软件测一下就知道了,还有就是可以用保护碱基调节整个引物 …
请问各位有人用过Bsa1限制性内切酶没有,它的保护碱基是什么? - 知乎