2020年12月18日 · CRISPR-Cas9 system can be used to generate knock-out cancer cell lines. An insertion or deletion induced by a single guide RNA (gRNA) is often used to generate knock-out cells, however, some...

CRISPR-Cas9基因敲入系统是Cas9内切酶切割双链DNA，且有一段高度同源的DNA修复模板存在的情况下，生物体内启动 HDR修复路径，将一段外源DNA定点插入基因内部。 同源性定向修复（HDR）途径，对比NHEJ修复途径，同源性定向修复（HDR）途径是更为精确的修复机制。 这种修复机制主要用于CRISPR Cas9系统介导的基因敲入。

2023年4月4日 · 我们先看看CRISPR/Cas9介导编码基因KO的原理，在Cas9剪切DNA，导致双链断裂（DSB）后，细胞利用非同源末端连接（NHEJ）进行修复。 NHEJ修复会在DSB位点随机引入碱基的插入或者缺失（Indel）。 ，这种移码往往会产生 （PTC），导致蛋白功能的丧失（提前翻译终止的多肽一般会被降解），从而达到KO效果。 因此，如果从这个角度来看的话，Cas9介导的KO影响的是蛋白的翻译过程，而对mRNA的表达丰度没有影响。 所以，我们是否就可以回 …

2024年4月17日 · Cas9（CRISPR-associated protein 9）是一种核酸酶，能够在特定的DNA序列上切割双链DNA。 在基因编辑中，研究人员设计了一个与目标DNA序列互补的单链RNA引导分子（sgRNA），将其与Cas9蛋白复合体一起导入目标细胞。

今天我们聊聊如何利用CRISPR/Cas9技术进行 稳定基因敲除细胞系的构建，以293T细胞为例。 sgRNA验证：在实验开始前，可以通过sgRNA在线验证，筛选高效率的sgRNA用于敲除细胞系的构建。 基因拷贝数：建议在开始实验之前确定目标基因的拷贝数。 许多永生化细胞系，尤其是癌细胞系，不是二倍体，因此可以具有3个或更多的染色体副本。 质粒的质量：使用高质量的 无内毒素 质粒DNA至关重要。 通过读取260 nm处的吸光度确定DNA浓度。 通过使用260 nm / 280 …

当您使用T7E1 酶完成了riboEDITTM CRISPR-Cas9 基因编辑效率的检测后，可根 据实验需要参照如下步骤进行KO 单克隆细胞筛选。 本操作仅供参考，下面以贴壁细胞为例，悬浮细胞注意事项请见注释。

2019年3月25日 · CRISPR-Cas9基因敲入系统是Cas9内切酶切割双链DNA，且有一段高度同源的DNA修复模板存在的情况下，生物体内启动HDR修复路径，将一段外源DNA定点插入基因内部。 同源性定向修复（HDR）途径，对比NHEJ修复途径，同源性定向修复（HDR）途径是更为精确的修复机制。 这种修复机制主要用于CRISPR Cas9系统介导的基因敲入。 在该修复路径中，需要将一段与预期编辑位点上下游紧邻序列具有高度同源性的DNA修复模板、特异的gRNA和Cas9核 …

As a proof of principle to demonstrate the CRISPR-Cas9 system’s utility for screening, we constructed genome-scale CRISPR-Cas9 knockout (GeCKO) and SAM libraries to identify genes that, upon knockout or activation, confer resistance to the BRAF-inhibitor vemurafenib in a melanoma cell line 30,37.

2023年9月15日 · CRISPR-Cas9 is a powerful technology for accurate and optimizable genome editing. Here, we present a protocol for generating monoclonal knockout (KO) cell lines using CRISPR-Cas9, ribonucleoprotein complexes (RNPs), and lipofection in adherent HNSCC cells from start to finish.

近期关于 crispr/cas9 系统做编码基因的ko（敲除）的验证方法问题，收到很多咨询。 大体分成两个，分别是： 是否可以通过用 qPCR 检测目的基因的mRNA来验证是否有敲除效果？