crispr-cas9是继 zfn 、 talens 等基因编辑技术推出后的第三代基因编辑技术，短短几年内,crispr-cas9技术风靡全球, 成为现有基因编辑和基因修饰里面效率最高、最简便、成本最低、最容易上手的技术之一，成为当今最主流的基因编辑系统。

Cas9蛋白具有识别、解旋、剪切的功能，这些功能仰赖了Cas9蛋白中不同的结构域。Cas9蛋白由两个“叶”(lobe)组成，（读者可以类比肺叶、脑叶这样的称呼。此外，不妨认为是两个亚基复合组成了Cas9蛋白，这两个亚基有不同的功能。但是为什么不直接称作亚基呢？

和普通Cas9不同的是，Cas9n (Cas9 Nickase)上有一个D10A的氨基酸突变，这个突变使得Cas9不再导致DNA双链断裂和NHEJ修复（一种会引来突变的修复），而是会引起单链断裂和BER修复（一种不会引起突变的修复），如下图。

Cas9 (CRISPR associated protein 9, formerly called Cas5, Csn1, or Csx12) is a 160 kilodalton protein which plays a vital role in the immunological defense of certain bacteria against DNA viruses and plasmids, and is heavily utilized in genetic engineering applications. Its main function is to cut DNA and thereby alter a cell's genome. The CRISPR-Cas9 genome editing technique was a significant ...

2023年1月16日 · Cas9 nickase (Cas9n), a Cas9 variant with mutations in the nuclease structural domain RuvC (D10A) of Cas9, only creates breaks in DNA strands complementary to the crRNA. 131 DNA single-strand ...

The RNA-guided, sequence-specific endonuclease Cas9 has been widely adopted as genome engineering tool due to its efficiency and ease of use. Derived from the microbial CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeat) type II adaptive immune system, Cas9 has now been successfully engineered for genome …

2024年4月17日 · CRISPR-Cas9技术是近年来生物学和医学领域的一项重大突破，它为精确编辑基因提供了一种高效、灵活的方法。本文将深入探讨CRISPR-Cas9的原理、编辑方法、应用以及基于此技术的基因编辑方法分析。

虽然Cas9n肯定比野生型SpCas9更具体，但当只有一个gRNA与Cas9n表达时，在目标地点仍然能够检测到DSB。这意味着 Cas9n 有可能在其任何 gRNA 的偏离目标站点之一绑定并导致一个因德尔。人们可以通过使用核酸酶死Cas9（dCas9）融合到非特异性内分泌酶FokI来克服这一限制。

2019年4月8日 · We have developed an ingenious method, termed Cas9 nickase-based amplification reaction (Cas9nAR), to amplify a target fragment from genomic DNA at a constant temperature of 37 °C. Cas9nAR employs a sgRNA:Cas9n complex with a single-strand nicking property, a strand-displacing DNA polymerase, and tw …

将Cas9n与一个逆转录酶融合，Cas9n只能将DNA进行单链断裂，产生一个切口，融合的RT则有可能以pegRNA上②序列为模板，以切开的末端为引物，进行逆转录。（也可能直接就解离了，不进行逆转录）