该策略依赖于 莫洛尼鼠白血病病毒 (MMLV) 逆转录酶的内在特性和使用独特的 模板转换寡核苷酸 (TS oligo，或 TSO)。 TSO全称Template switch oligo 模板转换寡核苷酸，是一种寡核苷酸，在反转录的过程中由逆转录酶加在非模板链5端的C寡核苷酸，用于下游的cDNA扩增。 在第一链合成过程中，当到达 RNA 模板的 5' 末端时，MMLV 逆转录酶的末端转移酶活性会在新合成的 cDNA 链的 3' 末端添加一些额外的核苷酸（主要是脱氧胞苷）。 这些碱基充当模板转换 (TS) 寡核苷酸锚定 …

逆转录酶（依赖RNA的DNA聚合酶）：① MMLV：莫洛尼白血病病毒中分离 ② 禽成髓细胞增生病毒 中分离. 传统的反转录体系：Buffer、dNTP、RNase inhibitor、Reverse Transcriptase、Oligo dT（主要针对真核生物mRNA的 Poly A尾）or Random Primer（主要针对无PolyA的mRNA 以原核生物为代表）or Gene-Specific Primer (主要针对已知部分序列的mRNA) RACE技术 （Rapid Amplification of cDNA Ends）-cDNA末端的快速扩增：一种基于PCR技术从样本中快速扩 …

2019年11月8日 · 简单来说，SMART技术主要利用了一种逆转录酶（Moloney murine leukemia virus reverse transcriptase，莫罗尼小鼠白血病病毒逆转录酶MMLV-RT）的两个特性： 1、首先这种逆转录酶在合成到Cdna的3’端，也就是对应的Mrna的5’端的时候会随机的引入几个不依赖于模板的碱基，多数情况下是三个胞嘧啶，有点像是画蛇添足地样子，但是却给科学家们带来了便利。 利用这个特点，我们可以通过设计一种template switching oligo（TSO）帮助逆转录酶完成模板 …

Single-cell RNA-Seq (scRNA-Seq) has led to an unprecedented understanding of gene expression and regulation in individual cells. Many scRNA-Seq approaches rely upon the template switching property of Moloney murine leukemia virus (MMLV)-type reverse transcriptases.

2017年2月2日 · In the presence of a single-stranded DNA often called template-switching oligonucleotide (TSO), which contains a stretch of ribonucleotide Gs at its 3′ end, MMLV-RT switches template from RNA...

2019年12月15日 · oligo-dTVN经过退火结合到mRNA的poly(A)，逆转录酶MMLV开始进行逆转录。 oligo-dTVN 的3'末端含有 VN ，其中 N 为A/T/C/G任何碱基， V 为A/C/G。 这样的设计能够使 oligo-dTVN 能够锚定到poly(A)+RNA的3′-UTR末端，从而在逆转录时避免poly(A)尾的逆转录。

2024年4月10日 · smart技术利用mmlv逆转录酶的特性，结合tso的巧妙设计，使得即使是单细胞rna样本也能生成完整的cdna库。tso在转录链的反转录过程中，逆转录酶会将一个c寡核苷酸加到非模板链的末端，随后在5'端的转换过程中，形成一个碱基锚定位点。 tso工作原理详解

2019年11月29日 · Single-cell RNA-Seq (scRNA-Seq) has led to an unprecedented understanding of gene expression and regulation in individual cells. Many scRNA-Seq approaches rely upon the template switching property of Moloney murine leukemia …

2021年5月16日 · 由于使用了特殊活性反转录酶（Moloney Murine Leukemia Virus , MMLV,莫洛尼鼠白血病病毒反转录酶）进行反转录，所以在它转录到mRNA的5'末端的时候，会在cDNA链3'端加上几个不依赖于模版的C碱基。

TSO引导MMLV逆转录酶发生模板转换，使其继续逆转录TSO序列获得双链cDNA。 加入PCR引物进行PCR预扩增; 利用Tn5转座酶对DNA进行打断的同时将接头添加到cDNA的两端，再进行最后一次PCR扩增后，即可上机测序。 相比较于Smart-seq，Smart-seq2的主要技术优化点包括 ：