1. pGEX系列载体. 该系列载体利用 tac启动子 ，在tac启动子和多克隆位点之间插入了两个有利于纯化的编码序列，其一是 谷胱甘肽巯基转移酶基因 ，其二是编码 凝血蛋白酶 或者 Factor Xa因子 （简称Xa因子）切割位点的序列。这样，外源基因表达时会表达出编码三个 ...

昆虫杆状病毒表达系统（Insect Cell Expression Systems）：适用于大规模表达和复杂蛋白的折叠，大部分蛋白能进行折叠和翻译后修饰，很好的分泌胞内蛋白，膜蛋白和分泌蛋白，无内毒素。 但成本较高，难以放大，外源蛋白表达处于极晚期病毒启动子的调控之下，由于病毒感染，细胞开始死亡，无法进行连续性表达. 大肠杆菌（Escherichia coli），又名大肠埃希氏菌，为 Escherich 在1885年发现的。 大肠菌是一种条件致病菌，在一定条件下能够引起人和多种动物的胃肠道/尿 …

来自GE Healthcare的谷胱甘肽转移酶(GST) 基因融合系统是一种表达、纯化和检测大肠杆菌中所产生的GST标签蛋白的多功能系统。系统包括三个主要成分: pGEX质粒表达载体、GST纯化的产品以及一系列GST检测产品。一系列切割GST标签的位点特异蛋白酶则是该系统的补充。

如果wb都看不到的话，你的蛋白就是表达； 3、pulldown实验或WB验证有表达，你再做表达条件的筛选； 4、在没有验证你的蛋白是否表达时，你可以用37℃，1mM IPTG进行表达，就让他们表达在沉淀里。

Bacterial vector for expressing GST fusion proteins with a Factor Xa site. For other reading frames, use pGEX-5X-2 or pGEX-5X-3.

pgex特点就是带有GST标签，可以增加目的蛋白的溶解度，别的没什么特点，属于大众型载体，目前也较常使用。 你说的没有表达有没有做全菌的sds-page啊，不管是不是形成包涵体全菌电泳都应该有条带，至于形不形成包涵体就取决于你的iptg浓度和诱导温度了，iptg越低，温度越低可溶性越好，我们曾做过0.1的iptg，4度诱导过夜的。 因为pgex载体是不能变性复性的，因为GST标签的活性会发生改变。 如果是全菌都没有表达，首先检查是不是你插入序列的问题，排出后看看是 …

在GST pulldown实验中，用GST融合蛋白共纯化His融合蛋白，后做WB检测His融合蛋白，用His－tag Antibody作为一抗，用pGEX-4T-1表达的GST蛋白做control，没有想到的是GST蛋白显示出很强的信号！

2013年8月27日 · GST表达融合蛋白载体pGEX-KG大小：5006bp，氨苄青霉素抗性(Ampr)，IPTG诱导表达酶切位点：BamHI930、SmaI937、EcoRI962、XbaI966、NcoI974、SalI980、XhoI985、SacI992

Efficient cleavage requires at least two copies of the NarI recognition sequence. EcoRV is reportedly more prone than its isoschizomer Eco32I to delete a base after cleavage. BssHII is typically used at 50°C, but is 75% active at 37°C. ApaI can be used between 25°C and 37°C. Sticky ends from different BanII sites may not be compatible.

但是有事实验要求需要无标签的蛋白，就需要加蛋白酶将GST 标签切掉，pGEX-6p-1需要加PreScission酶切，这个酶的优点是在4℃酶切，能一定程度的防止蛋白聚集及沉淀，而且500mM的咪唑不影响酶切效率，酶切的效果也还行；但是缺点是酶特别贵，500单位就得3000多块钱 ...