
博士学姐呕心沥血整理的 qRT-PCR 注意事项 - 知乎
透明和白色两种规格、分别适用于普通PCR和qPCR反应 矮管(0.1mL)设计降低由冷凝造成的污染、适用于保温过夜的实验,降低反应溶液的蒸发量、提高qPCR中荧光信号透过强度。
Real-Time PCR (qPCR)常见问题及解决方案 - 知乎
Real Time PCR (qPCR),即实时荧光定量核酸扩增检测系统,是一种利用荧光染剂检测每次PCR循环后产物总量的方法技术,是常规PCR的衍生反应。 主要是通过荧光信号的变化实时监测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变…
【从RNA提取到qPCR】qPCR实验设计及案例分析 - 知乎
qPCR实验设计要选择合适的定量方法,研究基因表达差异最常用的是相对定量,它有两个重要的方法: Ct法 和 双标准曲线法。 前者特点包括:只依靠Ct值、用于大通量(很多基因,如芯片结果)、计算简单、估计性的结果、要求目的基因和内参基因扩增效率都比较好。 后者其实是先做了绝对定量再进行比较,其特点包括:结果精确、对扩增效率要求不高、构建目的基因与内参基因的标准品、相当于两个绝对定量、每次反应都要作标准曲线。 下面我们通过两个具体的实验案例 …
qPCR技术介绍(一)——基础概念 - Takara
2023年3月30日 · Real Time PCR,即实时荧光定量PCR,也被称为定量PCR或qPCR,是实时监测PCR扩增产物并进行解析的方法。 由于定量PCR具有操作简单、快速方便、灵敏度高、重复性好、污染率低等优点,被广泛应用于医学检测、药物疗效考核、基因表达研究、转基因研究、基因 …
Real-time qPCR手册---手把手教你从菜鸟到高手-丁香实验
2013年8月19日 · SYBR@Green I是一种结合于小沟中的双链DNA结合染料,与双链DNA结合后,其荧光大大增强。 这一性质使其用于扩增产物的检测非常理想。 SYBR@Green I 的最大吸收波长约为497nm,发射波长最大约为520nm。 在PCR反应体系中,加入过量SYBR@Green 荧光染料,SYBR@Green 荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR@Green 染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完 …
实时荧光定量PCR原理及RT-PCR(qPCR)基础知识 | Thermo …
什么是定量检测? 定量检测是一种实时的PCR (qPCR) 检测。 测量(定量)每轮PCR扩增循环中,检测目标核酸片段的量。 目标分子可以为DNA、cDNA或RNA。 此方法指南主要对以下三种定量检测进行讨论: DNA/cDNA定量 采用一步法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的RNA定量
Brief guide to RT-qPCR - PMC
Reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) is a widely used technique for RNA quantification because of its practical and quantitative nature, sensitivity, and specificity.
献给初学者:Q-PCR 计算看这一篇就够了-丁香实验
2019年1月14日 · PCR 扩增的速率大家都知道,就是简单的指数增长,也就是 1 变 2,2 变 4,4 变 8 以此扩增。 数学形式就是 2 的 ct 次方,但是实际过程中的增量应该是(1+e)的 ct 次方,e 是扩增效率也称扩增系数。 一般我们都假设 e 为 1。 正常的 Q-PCR 我们都会有一个阈值,也就是我们平常说的平台期。 简单的说在平台期的所有基因扩增的数目是一致的。 而唯一有区别的则是 ct 值的不同。 Ct 值的含义是:每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数 …
深入了解 qPCR:实验原理、检测步骤和常见问题!
2024年3月12日 · 作为经典PCR技术的高级形式,qPCR,亦称实时定量PCR,利用特定染料在新合成的DNA链中的荧光信号,或者利用针对特定DNA序列的探针的片段,来监测DNA的互补过程这种技术的核心优势在于,它能够将DNA的检测和扩增过程相结合,从而能够即时地为科研工作者提 …
Real-Time qRT-PCR
2017年11月9日 · assay (named after Taq DNA polymerase) was one of the earliest methods introduced for real time PCR reaction monitoring and has been widely adopted for both the quantification of mRNAs and for detecting variation.